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高效液相分析的时候是不是为梯度洗脱设置抓耳挠腮，不要急，这份详细方法总结分享给你！你要的详解来啦～主打一个有求必应液相梯度洗脱详细方法总结：（以下内容主要针对成分全部未知的混合物样品，部分成分已知的样品可通过标品来进行定性指导，确定合适梯度）（1） 判断物质大致极性范围方法：采用高水相到高有机相，缓慢变换梯度的方法。通过查看出峰的主要时间段，初步判段样品的极性范围。举例：0~90min：95%水：5%甲醇~5%水：95%甲醇假设样品全部出峰在95%水~70%水的时间段（0~25min），那下一步则只需要考虑将这一段梯度的样品峰分开。后续的梯度设置也不需要考虑＜70%水了。（2） 调整洗脱梯度前面的例子中，25min就全部出峰完了，现在可以将25min调整至40～60min，拉开色谱峰之间的距离，观察出峰情况（峰型、分离度、峰与峰之间是否会出现出峰时间较长等情况）（3） 根据不同的出峰情况进行调整峰型：峰宽较大，峰尖端较钝，可能是样品浓度太高，柱子超负荷了，稀释样品即可。分离度较差：峰与峰交叉在一起，或者完全坨在一起，分不开，可以增大酸或碱的浓度，或者放缓这一段梯度变化的速度，如果还是分不开，考虑降低流速，但此时分析时间会延长。峰之间间隔较大：此时为了提高分析效率缩短分析时间，可以将这一段梯度变化时间缩短。（4） 选择适合洗脱体系高效液相中常用的洗脱体系有两种，即水-甲醇、水-乙腈，大多数情况下乙腈的洗脱效果较好，但价格也较甲醇贵。注意：不同厂家不同品牌的色谱柱和液相仪器，都会导致柱效差异，可根据实际情况再做调整哦~
