食品中黄曲霉毒素残留检测之高效液相色谱法

【内容摘要】样品经有机溶剂提取、净化和衍生化反应后，浓缩液注人HPLC仪，经色谱柱分离，分离出的组分依次进人荧光检测器(发射波长360 nm、激发波长245 nm)，产生相应的电信号，由记录仪记录响应信号，经微处理机自动计算及打印出样品中AFT含量(ng)。

高效液相色谱法

1.原理

样品经有机溶剂提取、净化和衍生化反应后，浓缩液注人HPLC仪，经色谱柱分离，分离出的组分依次进人荧光检测器(发射波长360nm、激发波长245nm)，产生相应的电信号，由记录仪记录响应信号，经微处理机自动计算及打印出样品中AFT含量(ng)。

2.仪器

HPI.C仪(具荧光检测器),RF-20A荧光检测，waters 2475荧光检测器。

3.试剂

①硅镁型吸附剂：100～200目，350℃烘2h，冷后装入密闭容器中，用前加水15％减活，平衡48h。可谇续傅用7天。

②流动相：甲醇+0.01mol·L-1 KH2P04(1+1)溶液配制后，经0.45um滤膜抽滤并脱气。

③层析柱，底层和上层为2.cIn厚的无水Na2S04，中层为0.4g硅镁吸附剂，均以氯仿湿润。

④其他试剂参照薄层层析法。

4.仪器工作条件

①具荧光检测器(激发波长245nm、发射波长360nm)，RF-20A荧光检测，waters 2475荧光检测器。

① GAIN置16，Span置Max。

② 柱：C1810um(Radialpakcartridges)。

③ 流动相：甲醇+0.01tool／LKH2P04(1+1)。

④ 流速：1.3mL／min。

⑥进样量：10 uL。

5.检测步骤

①样品提取与净化：准确称取样品10g于具塞锥形瓶中，加50mI。氯仿，振荡30min，过滤于层析柱中，用氯仿+正己烷(1+1)8mI，，氯仿+甲醇(9+1)10mL，淋洗除杂质，最后用20mL丙酮+水(99+1)洗脱黄曲霉毒素，收集于烧杯中，在50℃水浴中挥干溶剂，再用氯仿分次将残渣洗人2mL具塞试管中，并于50℃水浴中通Nz吹干。

②衍生化反应：向具塞试管中加200uI。正己烷，50uL三氟乙酸，将盖盖紧，充分混匀1min，静置30rain后用Nz吹干。加100uL流动相，充分混匀，待检。

③标准液的处理：取适量标准应用液，按样品处理方法萃取、净化和衍生化反应，定容，使AFTBl、AFTMl最后浓度均为0.1ng·uL-1。AFT保留时间及标准色谱图：保留时间(min) ：AFTM1 3.36，AFTG1 4.72，AFTB1 16.00，FTG2 10.12，AFTB214.40。

6.说明

①本法应在1天内完成检测，否则结果偏低。

②层析柱中硅镁吸附剂应先用氯仿调为糊状加入。